Formée au métier de comédienne à l'Actors Studio, Jennifer Esposito doit d'abord se contenter d'un emploi de serveuse avant d'apparaître pour la première fois à l'écran dans la série télévisée The City (1995). De 1997 à 1999, elle joue dans le feuilleton Spin City, où elle interprète "Stacy", la secrétaire sarcastique et exubérante du maire de New York, incarné par Michael J. Fox. En 1997, Jennifer Esposito fait ses débuts au cinéma en apparaissant brièvement dans A brother's kiss. Elle enchaîne ensuite les petits rôles aux côtés d'Edward Burns dans "Quitte ou double" (1998), de Denzel Washington dans He Got Game puis dans Summer of Sam (1999) aussi de Spike Lee.